Passo a passo: preparação do tecido para análise histopatológica
Na confecção de uma lâmina, é necessário que o tecido seja finamente fatiado, processo chamado de corte histológico. Em seguida, passa-se para a etapa de fixação cujas finalidades envolvem: (1) Evitar a digestão dos tecidos por enzimas existentes nas próprias células (autólise). (2) Endurecer os fragmentos.
Podemos resumir os passos das técnicas histológicas com a seguinte seqüência: fixação dos tecidos, desidratação, inclusão, microtomia (corte em fatias finas), coloração e montagem de lâminas.
Os procedimentos utilizados para se obterem amostras de tecido ou preparados histológicos retirados de um organismo para exame microscópico incluem: coleta do material, fixação, clivagem, processamento, inclusão, microtomia (corte) e coloração.
Basicamente, o procedimento usual segue a ordem: fixação/desidratação/ secagem pelo método do "ponto crítico" e envolve as seguintes etapas: - Fixação das amostras (1 a 5 mm3) durante 2 h até 24 h ou mais. - Lavagem em solução tampão cacodilato ou fosfato, várias vezes.
A amostra de tecido é imersa em fixador de volume no mínimo de 2/3 maiores que volume do tecido a ser fixado. O fixador deve se difundir através do tecido de maneira a fixar, tanto o tamanho e a densidade do tecido, como também o tipo de fixador deve ser tomado em consideração.
Corte, coloração, fixação em lâmina e congelamento.
A histoquímica é uma técnica histológica que tem por objectivo a identificação da natureza química de constituintes celulares. Consiste na coloração específica desses constituintes, recorrendo basicamente a substâncias que, reagindo com os componentes celulares, dão origem a produtos corados.
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