Eletroforese – Técnica A eletroforese é uma técnica baseada na separação de partículas, que ocorre quando as mesmas são dissolvidas ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente elétrica é aplicada.
A eletroforese é muito utilizada e tem papel importante na análise laboratorial e também em pesquisas científicas. Essa técnica foi empregada pela primeira vez em 1937 pelo bioquímico Arne Tisélius e permite realizar a separação de macromoléculas como DNA, RNA, proteínas e enzimas com tamanhos e cargas diferentes.
A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar fragmentos de DNA de acordo com seu tamanho. As amostras de DNA são carregadas nos poços (cavidades) localizados numa das extremidades de um gel, e uma corrente elétrica é aplicada para fazê-las avançar pelo gel.
Eletroforese refere-se à migração de partículas ou solutos eletricamente carregados em um meio líquido sob a influência de um campo elétrico.
A seguir serão discutidas as quatro etapas necessárias para a realização da eletroforese em gel de agarose, a saber: preparação do gel, aplicação das amostras, corrida eletroforética e a análise e o registro dos resultados.
Nesse sentido, a eletroforese é uma técnica laboratorial simples que utiliza a corrente elétrica para promover a separação de moléculas carregadas, como proteínas e ácidos nucleicos.
Tampão TAE (tampão Tris-Acetato-EDTA) é uma solução tampão usada em eletroforese em agarose, tipicamente para a separação de ácidos nucleicos tais como o DNA e RNA. Ele é feito de tampão acetato da base Tris, normalmente a pH 8.0, e EDTA, os quais sequestram cátions divalentes.
As moléculas de DNA têm carga negativa devido aos grupos fosfatos. Quando é aplicada uma corrente eléctrica as moléculas tendem a deslocar-se do pólo negativo para o pólo positivo. Quanto maior a molécula mais devagar migra.
Com auxílio de uma proveta colocar 100 mL de TBE 1X em um balão volumétrico, após, adicionar a agarose pesada e homogeneizar; Levar ao microondas para aquecimento por aproximadamente 5 minutos ou até que a solução esteja completamente translúcida (sem bolhas);
Em uma eletroforese, o gel de agarose fica submerso em uma cuba que contém uma solução tampão, que permite a passagem e fluxo de corrente elétrica. ... Na eletroforese, os ácidos nucléicos, DNA e RNA, migram do pólo negativo em direção ao pólo positivo.
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