Na técnica, coloca-se um pequeno volume de uma amostra líquida numa coluna cromatográfica com partículas porosas (fase estacionária). Então um reagente é dispensado na coluna, fazendo com que os componentes da mistura desloquem-se através da coluna.
A cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE ou HPLC) é um método de separação de compostos químicos em solução, onde o sucesso da separação cromatográfica só é possível se for aplicada uma fase móvel (FM) correta a uma fase estacionária (FE) conveniente.
Alguns cuidados que devem ser tomados: a) antes de ser iniciar o processo cromatográfico, a câmara, contendo a mistura de solvente, já deve estar saturada de seus vapores, b) o solvente não deve correr até o bordo superior do papel (cuidado com o número de horas de processamento) e nem tampouco uma pequena distância.
c) A coluna de separação é parte fundamental da CLAE sendo responsável pela separação dos componentes presentes na amostra analisada.
A cromatografia é uma técnica de análise muito usada para separar mistura de substâncias químicas. A origem do nome vem do grego chroma, que significa cor e, graphein, escrever. A técnica da cromatografia visa separar elementos químicos orgânicos e bioquímicos familiarizados.
A cromatografia tem como princípio básico a separação de determinadas misturas, utilizando dessa forma duas fases, uma móvel e outra estacionária. A fase móvel pode ser constituída por uma substância líquida ou um gás, já a fase estacionária é composta por um líquido ou um sólido.
Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC)
Os principais detectores utilizados em cromatografia de fase líquida, são:
A cromatografia líquida de alta eficiência – CLEA ou também conhecida com a sigla HPLC (High Performance Liquid Cromatography) faz parte do grupo de classificação da cromatografia colunar. Essa técnica cromatográfica normalmente é empregada em amostras de alimentos, água, solo, sangue, urina, etc.
*Cromatografia líquida: “Clássica” – feita em colunas de vidro, sob pressão atmosférica. Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) – utiliza-se colunas metálicas (normalmente) e pressões de fase móvel elevadas, obtidas com o auxílio de uma bomba de alta pressão.
A fase móvel é líquida em ambos os casos. Cromatografia em papel (plana): a retenção das substâncias é devida à partição das duas fases líquidas, uma móvel e outra estacionária, sendo esta constituída pelo líquido absorvido no papel. Encontra-se bastante divulgada devido à sua facilidade experimental e ao seu baixo custo.
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (CLAE) 2 CONCEITOS E FUNDAMENTOS “HPLC usa pressões elevadas para forçar a passagem do solvente através de colunas fechadas que contém partículas muito finas capazes de proporcionar separações muito efecientes (com alta resolução)”. Daniel C. Harris. 3 O PROCESSO CROMATOGRÁFICO
Para estimar a eficiência de uma coluna cromatográfica é possível usar dois termos que estão relacionados entre si: o número de pratos teóricos ({displaystyle N}) e a altura equivalente a um prato teórico ({displaystyle H}), que se relacionam pela equação a seguir: {displaystyle N= {frac {L} {H}}}
Cromatografia é um processo de separação e identificação de componentes de uma mistura. Essa técnica é baseada na migração dos compostos da mistura, os quais apresentam diferentes interações através de duas fases.
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