1.2 – Princípios e métodos de imunodiagnóstico São vários os métodos para a realização dos testes sorológicos: precipitação, floculação, aglutinação, imunofluorescência, testes imunoenzimáticos e radioimunoensaios.
TÉCNICAS DE IMUNODIAGNÓSTICO
As técnicas imunológicas consistem basicamente na interação antígeno- anticorpo, sendo que o anticorpo por ter alta especificidade e auxilia na constatação, isolamento ou no cálculo de um antígeno típico.
Eletroimunodifusão • Método: A migração Ag e do Ac é dirigida por um campo elétrico, aumentando a velocidade de reação e a sensibilidade da técnica. Pode ser dividida em: – Simples Linear (Laurell ou Foguete) : Anticorpo é– Simples Linear (Laurell ou Foguete) : Anticorpo é incorporado ao gel de agarose.
Testes de hemaglutinação ou aglutinação indireta ou passiva São de execução simples. Podem ser feitos em amostras de soro ou plasma. Não necessitam equipamentos para sua realização ou para a leitura dos resultados.
A microtécnica de soroneutralização foi realizada com células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney) empregando 100 TCID 50% do protótipo viral Los Angeles do BHV-1. A incubação do vírus/soro foi completada em 1 hora a 37ºC, em atmosfera de 5% de CO2, segundo a metodologia descrita por Britsch9.
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Este método usa o antígeno marcado radioativamente e anticorpos para determinar a concentração de antígenos com uma precisão bastante elevada, sendo bastante usada para a determinação da concentração de hormônios. Este método se baseia basicamente na reação reversível antígeno anticorpo.
A rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) é uma infecção específica dos bovinos provocada pelo herpes-vírus.
Assim, esse exame serve para detectar antígenos dos seguintes vírus em sangue: Adenovirus. Alphavirus. Bunyaviridae.
Os testes de inibição da hemaglutinação (HI) são realizados essencialmente como descrito por Joo et al., (1976), como segue: São utilizadas microplacas (fundo em “v”) de 96 orifícios e hemácias frescas de cobaios sadios, coletadas em Alsever e lavadas em PBS, conforme descrito anteriormente.
O exame Vdrl consiste em um exame de sangue comum. O responsável retira uma amostra de sangue da veia do paciente, geralmente no braço. Posteriormente, ele envia esse material para ser analisado em laboratório. Qualquer pessoa que tenha entrado em contato com a bactéria vai apresentar resultado positivo para o exame.
O teste de imunodifusão radial simples permite determinar a concentração de uma amostra de antígeno. O soro específico é incorporado a agarose que recobre uma lâmina de vidro. Em orifícios feitos na agarose, são adicionadas diferentes concentrações do antígeno. A lâmina é incubada por 24/48 horas.
A imunodifusão baseia-se na difusão de substâncias solúveis por movimentos moleculares ao acaso em meio gelificado como o ágar ou gel de agarose.
A técnica de Imunofluorescência Direta se baseia numa reação antígeno-anticorpo. Esta técnica permite a visualização de antígenos em tecidos ou em suspensões celulares utilizando corantes fluorescentes (fluoresceína isocianetada e rodamina).
Exames imunológicos para doenças infecciosasExames de aglutinação. Nos testes de aglutinação (p. ... Fixação de complemento. A fixação do complemento mede o consumo de complemento pelo anticorpo (fixação do complemento) no soro ou no líquor. ... Ensaios imunoenzimáticos. ... Exames de precipitação. ... Teste Western blot.
Existem dois tipos de Ac empregados em imunoensaios: os policlonais e os monoclonais. Os Ac monoclonais apresentam maior especificidade que os policlonais, afinidade por um epitopo específico e menor probabilidade de reatividade cruzada entre Ag similares6,24,44,45.
O fundamento básico das técnicas de aglutinação é similar ao princípio das técnicas de precipitação, diferindo na adsorção do antígeno (Ag) ou do anticorpo (Ac) a micropartículas insolúveis ou células e permitindo leitura visual e rápida.
HEMAGLUTINAÇÃO INDIRETA
As hemácias estão entre os melhores suportes de antígenos para os testes de aglutinação. Na hemaglutinação indireta (HAI) elas são suportes para antígenos que são adsorvidos à sua superfície, que para doença de Chagas são antígenos de Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença.
Os testes sorológicos ou imunoensaios são técnicas para a detecção e quantificação de antígenos ou anticorpos, podendo utilizar reagentes não-marcados ou reagentes marcados.
Exemplo: Hemaglutinação Passiva para a Doença de Chagas: As hemácias são revestidas com Ag do T. cruzi (ligação covalente) e então distribuídas nos poços da placa. O soro teste e os controles positivos e negativos, devidamente diluídos, são adicionados aos poços da referida placa.
1. Aglutinação/Hemaglutinação Quando um antígeno é particulado, a reação de um anticorpo com o antígeno pode ser detectada pela aglutinação (agrupamento) do antígeno. O termo geral aglutinina é usado para descrever anticorpos que aglutinam antígenos particulados.
O que é? Teste para a determinação de anticorpos anti-Treponema pallidum por hemaglutinação indireta para diagnóstico sorológico da Sífilis. Este procedimento se presta a realização de ensaios para detecção de anticorpos anti-T.
De forma prática, o principal objetivo do exame de sorologia é identificar a presença de antígenos pertencentes a vários microrganismos e de anticorpos que são desenvolvidos como resposta à presença destes agentes infecciosos no sangue do paciente.
Os sinais clínicos variam desde a forma aguda e toxêmica até a forma crônica e inaparente, sendo os bezerros os mais suscetíveis aos processos toxêmicos. Os animais podem apresentar febre, sangue na urina, anemia, mucosas amareladas causadas pela hemólise intravascular.
Como tratar a ceratoconjuntivite bovina? As drogas mais utilizadas são a Penicilina G ou a Gentamicina. Quanto mais cedo for instituído o tratamento antibiótico, menos graves serão as lesões à córnea. O principal entrave na terapia da infecção ocular é a dificuldade de manejo do tratamento tópico.
Antibióticos de largo espectro e anti-inflamatórios não esteróides podem ser utilizados para minimizar a severidade da inflamação, principalmente em touros, nos quais pode resultar em temporária diminuição da fertilidade e aderência do pênis ao prepúcio.
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