Originalmente encontradas no genoma de Escherichia coli em 1987 e descritas por Yoshizumi Ishino e colaboradores, as sequências curtas intercaladas regularmente só começaram realmente a ser investigadas no início dos anos 2000, sendo então encontradas em diversos outros organismos procarióticos, tanto do domínio ...
Seu trabalho mostrou que a molécula faz parte do antigo sistema imunológico da bactéria, o Crispr/Cas, que "desarma" os vírus ao fragmentar seu DNA. Charpentier publicou sua descoberta em 2011 e, no mesmo ano, iniciou uma colaboração com Jennifer Doudna, uma bioquímica experiente com vasto conhecimento de RNA.
Funcionamento Do Sistema CRISPR/CAS9 O sistema CRISPR/Cas9 tem como base o mecanismo de defesa bacteriano contra o vírus invasor, que ao detectar um DNA viral já conhecido, produz duas fitas de RNAs curtos, onde uma delas terá a sequência correspondente a do vírus invasor (Figura 1).
A Cas9 (CRISPR associated protein 9) é uma proteína responsável pela ativação do sistema CRISPR, sendo uma ferramenta essencial para a edição do material genético, uma vez que é capaz de romper as cadeias dentro do DNA alvo quando guiada pelo RNA-guia. ...
PAM é um componente do DNA do vírus ou plasmídeo invasor e não faz parte do loco CRISPR bacteriano. O sítio de clivagem da nuclease Cas9 situa-se três nucleotídeos acima (upstream) da sequência PAM no DNA-alvo.
O sistema CRISPR-Cas9 funciona de forma semelhante no laboratório. Os pesquisadores criam um pequeno fragmento de RNA com uma sequência curta de “guia” que atribui (se liga) a uma sequência alvo específica de DNA em um genoma. O RNA também se liga à enzima Cas9.
Resumidamente, pode-se dizer que, por meio dessa técnica do Crispr-Cas9, é possível atuar diretamente no gene defeituoso, como um míssil teleguiado, atingindo as células-alvo. Nessa técnica, a enzima Cas9, uma nucleasse, corta as duas fitas da dupla hélice do DNA, abrindo o espaço para a inserção de um novo trecho.
A Cas9 (CRISPR associated protein 9) é uma proteína responsável pela ativação do sistema CRISPR, sendo uma ferramenta essencial para a edição do material genético, uma vez que é capaz de romper as cadeias dentro do DNA alvo quando guiada pelo RNA-guia. ...
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