O princípio básico da reação de ELISA é a imobilização de um dos reagentes em uma fase sólida, enquanto outro reagente pode ser ligado a uma enzima, com preservação tanto da atividade enzimática como da imunológica do anticorpo.
TESTE DE ELISA O teste de “ELISA” (do inglês “Enzyme Linked ImmunonoSorbent Assay) se baseia reações antígeno-anticorpo detectáveis através de reações enzimáticas. A enzima mais comumente utilizada nestas provas é a peroxidase, que catalisa a reação de desdobramento da água oxigenada (H2O2) em H2O mais O2.
O teste de ELISA é responsável pela detecção de diferentes doenças infecciosas, uma vez que a maioria dos agentes patológicos leva à produção de imunoglobulinas. Também pode ser utilizado no diagnóstico de doenças auto-imunes ou alergias. Este método de diagnóstico é o de eleição para a detecção do vírus HIV.
Conheça os diferentes tipos de ELISA
O teste é usado para diversos testes em um laboratório, como para detectar doenças autoimunes (ex.: Artrite Reumatoide), alergias, patologias que desencadeiam produção de imunoglobulinas, doenças infectocontagiosas (ex.: Doença de Chagas, HIV), dosagem de hormônios (ex.: teste de gravidez, T3, T4, testosterona, ...
Basicamente corresponde as etapas de: adição de amostra tamponada a placa de teste; posterior adição de anticorpo primário acoplado a enzima e adição de substrato cromogênico.
As sorologias para COVID-19 são testes que detectam no sangue do indivíduo a presença de anticorpos da classe IgM, IgA ou IgG contra proteínas do vírus SARS-CoV-2.
O teste de ELISA tem 4 tipos principais: ELISA direto, ELISA indireto, ELISA sanduíche e ELISA de competição.
Na fase de detecção, após a lavagem da amostra e retirada dos antígenos que não se ligaram aos anticorpos de captura presentes na placa, se o sinal (mudança de cor) estiver reduzido significa que antígenos procurados no teste se ligaram, comprovando sua presença em grande concentração na amostra.
Passo a passo. Como há alguns tipos diferentes de teste de ELISA, também são diferentes as formas de realização. 1. Um antígeno é adicionado à placa e se liga à sua superfície. 2. É feita uma lavagem para retirar os antígenos que não se ligaram.
O perfil de ELISA proporciona um material in-vitro semiquantitativo para detecção de diferentes anticorpos em uma única microplaca. A fase sólida do Pool ELISA é coberta com uma composição de antígenos para detecção semiquantitativa de anticorpos cuja especificidade deve ser investigada em sequência através de material monoespecífico.
O teste de ELISA tem 4 tipos principais: ELISA direto, ELISA indireto, ELISA sanduíche e ELISA de competição. O ELISA direto é quando o alvo é um antígeno ligado à placa, e um anticorpo primário conjugado a um emissor de cor é colocado diretamente ao alvo, e é um tipo pouco usado. Já o ELISA indireto é mais usado e é bem parecido com o direto.
Alguns kits ELISA competitivos incluem o antígeno ligado à enzima em vez do anticorpo ligado à enzima. O antígeno marcado compete pelos sítios de ligação do anticorpo primário com o antígeno da amostra (também chamado de antígeno teste).
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