Objetivo: Isolar e identificar os microorganismos encontrados no solo acometido pelo agroquímico para tentar identificar presença de patógenos.
Em microbiologia, há varias técnicas de isolamento de micro-organismos, algumas são utilizadas para recuperação de micro-organismos a partir de amostras de solo e sedimentos, outras de amostras de água, rios e lagos ou de amostras de animais, plantas, superfícies, entre outras.
A técnica de isolamento de microrganismos é utilizada para estudar um microrganismo em particular, sendo, para isso, separado da população em que está inserido e cultivado em culturas puras.
Isolamento direto – Para fungos que produzem corpos de frutificação sobre o material doente ou estruturas de resistência (por exemplo, no solo). Essas estruturas são coletadas e colocadas diretamente sobre o meio de cultura.
Antes de inserir os microrganismos para isolamento e cultivo, uma camada fina de gel Ágar é colocada na placa de petri. Após inocular os microrganismos no gel, as placas são incubadas na temperatura adequada para o procedimento, geralmente são 37 graus Celsius.
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Para isolar uma cultura pura, uma colônia individual é transferida do meio para um tubo de ensaio. Métodos de inoculação de tubos c/ meio líquido/sólido em tubo de ensaio. existem em cultura mista, com muitas espécies ≠s no mesmo ambiente.
A técnica de esgotamento em placa consiste em depositar o material coletado sobre uma parte da placa e depois espalhá-lo com a alça de platina em campos diferentes de modo a obter quantidades progressivamente menores do material.
Diferentes microrganismos possuem diferentes necessidades, por isso o meio de cultura é adaptado para satisfazer essas necessidades, utilizando nutrientes específicos dependendo do microrganismo de interesse. Além desses fatores, deve ser levado em conta o pH e a quantidade de oxigênio ou mesmo a sua ausência.
O Ágar Sabouraud Dextrose (SDA) é usado para o isolamento, cultivo e manutenção de espécies não patogênicas e patogênicas de fungos e leveduras .
O isolamento de fungos é obtido em cultura pura apartir de tecidos doentes do hospedeiro, quando obtido um organismo em cultura pura não significa que ele seja o agente causal da doença. Vários meios são utilizados porém o mais usado é o Batata-Dextrose-Ágar (BDA) e Extrato de Malte-Ágar (EMA).
A obtenção de uma cultura pura a partir de uma cultura mista denomina-se isolamento, conseguido através da semeadura dos microrganismos na superfície de meios de cultura sólidos em placas de Petri, o que permitirá a formação de colônias (que são populações isoladas que crescem na superfície destes meios).
O isolamento de fungos pode ser feito diretamente a partir de algum substrato ou de um compartimento ambiental (ar, água, solo), utilizando vidraria (tubos de ensaio, placas de Petri) e instrumentos (estiletes, pinças, agulhas) esterilizados, com a manipulação em uma zona de segurança próximo a uma chama e/ou em uma ...
Objetivo - Obter colônias isoladas, o que permite distinguir os diferentes micro-organismos em um material ou cultura polimicrobiana através da sua morfologia colonial. ... A flambagem da alça entre cada sequência de estrias aumenta a probabilidade de obtenção de colônias isoladas.
A contagem total de microrganismos pode ser realizada através do método de plaqueamento em superfície ou em profundidade. O inóculo é dispensado sobre a superfície do meio e espalhado, sóbre a mesma, com o uso de uma alça de Drigalski. O inóculo é dispensado em placas de Petri.
A técnica de semeadura por esgotamento é uma das mais utilizadas quando se quer isolar culturas puras em amostras com culturas mistas, formando colônias isoladas e possibilitando a identificação dos microrganismos que cresceram nesse meio.
Objetivo: Essa técnica é muito utilizada para visualização de determinadas propriedades metabólicas, como a produção de enzimas hidrolíticas (hidrólise de substâncias do meio - gema de ovo, sangue...), e produção de pigmentos.
Ágar sangue: características e função
Por conta da sua alta concentração de carboidratos e composição química rica em nutrientes, o ágar sangue é um tipo de meio de cultura excelente para o desenvolvimento de diversos tipos de fungos, filamentosos e colônias leveduriformes.
Veja abaixo os principais tipos de meios de cultura disponíveis.Meio de cultura enriquecido. ... Meio de cultura seletivo. ... Meio de cultura diferencial. ... Meio de cultura de transporte. ... Meio de cultura de triagem. ... Meio de cultura de identificação. ... Meio de cultura de contagem. ... Meio de cultura de estocagem e manutenção.
Os meios de cultura são classificados de acordo com seu estado físico, podendo ser sólido, quando possui agentes solidificantes como o ágar; semissólido, quando a consistência de ágar e/ou gelatina é intermediária, ou líquido, quando não possui solidificantes, caracterizando-se como caldo.
“A cultura de fungos é feita em laboratório. O exame é rápido, indolor e muito simples. Consiste na raspagem de parte da região afetada para análise. A partir do resultado é que o médico conclui o diagnóstico e define o tratamento, que pode incluir medicamentos orais e tópicos, de acordo com a gravidade da lesão.
Subcultivo (Repique) das culturas Trata-se de uma etapa que consiste na preparação de uma suspensão bacteriana, a partir de uma cultura com raras colônias que serão inoculadas no meio de Ogawa-Kudoh ou outros meios, com o objetivo de aumentar a carga bacteriana para a realização das provas de identificação das espécies ...
A dica mais valiosa no preparo de meios de cultura que contém ágar, sem dúvida, é deixar o pó hidratando os 10 minutos antes do aquecimento! Observe aí no seu laboratório como o meio de cultura vai ficar mais homogêneo, solidificar mais rápido na placa e não vai dar grumos se você seguir esse “conselho”!
As técnicas de semeadura são utilizadas para se obter colônias isoladas em meio sólido, para identificação de bactérias ou leveduras presentes em materiais biológicos em seus diferentes tipos morfológicos. Lembre-se de: Sempre flambar a alça bacteriológica quando necessário, ou usar alça descartável.
A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias.
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A coloração envolve 3 etapas principais:Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo);A descoloração (utilizando etanol / acetona);A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).
Entre as técnicas de semeadura em microbiologia mais utilizadas, podemos citar a de esgotamento. Nela, a suspensão bacteriana (que é o líquido com o microrganismo) é espalhada de forma aleatória em toda a placa, até que todo o material seja utilizado.
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