Segundo esse conceito, quando as estruturas celulares são cobertas pela violeta-de-metila, todas se coram em roxo. Com a adição do lugol, também chamado de mordente, ocorre a formação do completo iodo-pararosanilina. Esta reação tem a propriedade de fixar o corante primário nas estruturas coradas.
O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.
O método consiste em sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, c reagentes violeta de genciana, lugol, etanol-acetona fucsina. As bactérias que adquirem a coloração azul violet chamadas de Gram-positivas e aquelas que adquirem a colo vermelho são chamadas de Gram-negativas.
A técnica de coloração Gram em análises clínicas é usada principalmente para identificar preliminarmente a morfologia das bactérias ou para estabelecer se há um número significativo de bactérias nas amostras clínicas.
O lugol é um suplemento iodado a partir da combinação de iodo e iodeto de potássio. Estimula o bom funcionamento da glândula tireoide, melhorando a produção de hormônios, e controla a síntese de estrogênio nos ovários.
Safranina (também chamada de safranina O ou vermelho básico 2) é um corante biológico usado em histologia e citologia. Safranina é usada como um corante de contraste em alguns protocolos (métodos) de coloração, colorindo todo núcleo celular de vermelho.
A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (18), em 1884, e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica.
A coloração envolve 3 etapas principais:
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